Determinazione dell’attività emolitica

L’attività emolitica di una droga è dovuta fondamentalmente al suo contenuto in saponine.

Le saponine sono glicosidi generalmente triterpenici e steroidei. Sono composti da un aglicone, detto sapogenina, e una frazione zuccherina.

La sapogenina ha carattere lipofilo, mentre la frazione zuccherina fortemente idrofila. Ciò conferisce alla saponina la tipica caratteristica dei tensioattivi.

escina, saponina dell'Hedere helix

Colesterolo

Somiglianza fra l'aglicone dell'escina (sapogenina) e il colesterolo, molecola strutturale delle membrane cellulari animali.

L’attività emolitica delle saponine (e non delle sapogenine come erroneamente riportato in alcuni siti), è dovuta proprio a questo. L’aglicone, affine al colesterolo, unito alle molecole saccaridiche, si rende capace di destabilizzare le membrane permeabilizzandole, e causando dei fori veri e propri, causando l’emolisi degli eritrociti. La sola sapogenina (lipofila) priva della componente idrofila, non può svolgere questa funzione.

Fra le saponine più conosciute vi sono, ad esempio, l’escina (Aesculus hippocastanum), la glicirrizina (Glycyrrhiza glabra) e l’ederina (Hedera helix).

Osservando l’attività emolitica di una droga su una data quantità di sangue di bue, si può definire il contenuto in saponine di quella droga.

Il saggio di determinazione si svolge utilizzando terreno solido agar con un soluzione conosciuta di sangue di bue.

Si osserva l’azione della soluzione saponinica in esame e la si compara con l’attività della soluzione saponinica standard di riferimento.

Le soluzioni in esame vengono tenute a un pH di 7,4 utilizzando un tampone fosfato.

Viene esaminata sia la soluzione saponinica estratta da una certa droga, sia una soluzione del fitocomplesso estratto dalla stessa droga.

Dopo avere osservato e annotato le soluzioni capaci di produrre emolisi totale del campione si sangue, si procede con la seguente formula:

Attività emolitica = S x a / b

dove:

S = 30.000 – rappresenta un valore fisso relativo alla soluzione saponinica standard di riferimento;

a = quantità di saponina in esami in grammi, capace di causare emolisi totale;

b = quantita di droga in grammi, il cui estratto produce emolisi totale.